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 酶聯(lián)免疫檢測方法有間接法，阻斷法，競爭法，夾心法等。夾心法中，包被的抗體與酶標抗體，假如是單抗，理論是不能用一樣的，不外商品化的單抗有可能是混合單抗，識別不同的表位的抗體混在一起，這樣就又可以用一樣的。在今天的技術(shù)下載內(nèi)容中，是基免為您分享酶聯(lián)免疫雙抗夾心法檢測攻略：

一、標本因素不可忽略

    1.振蕩提取

    將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部，提取待測組分。

    ① 振蕩方式：振蕩器上進行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。

    ② 在組織樣本中加入有機溶劑之間提取時，應邊加邊振蕩，防止組織凝結(jié)成團，不利于提取。

    3.在用有機溶劑提取過程中，如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，解決的方法有：①用細頭輕輕的攪拌，破壞乳化后，再重復離心。②再加入適量的提取劑，重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。

    4.濃縮

    由于凈化過程中引入的溶劑，可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干，再用復溶液溶解干燥殘留物。

    濃縮方式：氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜。

    注意：

    ① 在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質(zhì)干擾。

    ② 在吹樣本時，針頭應在液面上空，避免與樣本接觸，防止產(chǎn)生交叉污染。

    ③ 樣本吹干后應立即取下，避免吹的時間過長，影響zui終檢測結(jié)果。

    ④ 不同的藥物，吹干后樣本的保質(zhì)期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復溶。

    5.凈化

    經(jīng)過提取的待測組分中通常含有一些會干擾試劑盒中抗原抗體反應的雜質(zhì)或者是含有與待測物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測組分與雜質(zhì)分離的過程，我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見的凈化是液液分配法。

二、試劑盒的靈敏度也是關(guān)鍵之一

    一般說來，如果待測樣本中目標蛋白的濃度比較高，則對靈敏度要求相對小一些。如果待測樣本中目標蛋白的濃度比較低，則必須考慮靈敏度的問題。試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準確的，低于這個值因為與曲線是個“S"型結(jié)構(gòu)有關(guān)，所以結(jié)果是有偏差的，是一種估算。再加上實驗誤差，所以達不到理想的效果。建議選擇試劑盒時，應該看曲線上zui小的濃度值，而不是試劑盒上寫的靈敏度。

    相對靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%