在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中，血清是常見的科研試劑之一，常見的血清種屬有人的和動(dòng)物兩種，而動(dòng)物的又分為牛、豬、雞、羊等，根據(jù)客戶對產(chǎn)品種屬與來源的選擇，價(jià)格也是不同的。對于實(shí)驗(yàn)新手來說，稍有不慎就會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至讓花費(fèi)幾千元買來的血清失去效果。那么我們要如何正確的使用與操作呢？今天上海晶抗與您探討“如何巧妙利用血清培養(yǎng)細(xì)胞”。
我們今天要說的血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)采用的是貼塊法，這種方法具有獲得平滑肌細(xì)胞純度高，量多，操作簡便的優(yōu)點(diǎn)。但用貼塊法易使平滑肌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)肌絲喪失，亞細(xì)胞器增加。
操作方法：動(dòng)物經(jīng)頸動(dòng)脈放血后，在無菌操作下迅速取出胸腹主動(dòng)脈段，置于含Hank's液的平皿中漂洗3次，將凝塊洗干凈后剝除外膜的纖維脂肪層，然后縱行切開血管，刮除內(nèi)膜即內(nèi)皮細(xì)胞迅速撕下中膜內(nèi)、中層，切成約1mm寬的小條，浸泡在含血清的Hank's液中，并將撕下小組織塊種植于培養(yǎng)瓶壁。置于37℃恒溫箱，2h左右，取出培養(yǎng)瓶加入20%胎牛血清的培養(yǎng)液，再放回培養(yǎng)箱內(nèi)靜止培養(yǎng)4天。4天后可見細(xì)胞從組織中遷移游出。
在這方法中，大家可要注意啦！不同動(dòng)物血管結(jié)構(gòu)有差異，豬和猴較易操作，但小動(dòng)物如兔、鼠因其血管小，血管壁薄等特點(diǎn)，使之難以分離。另外組織塊太薄，不易粘附培養(yǎng)基，也使細(xì)胞較難生長。
上海晶抗特別提示，實(shí)驗(yàn)中請注意：
1. 根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的種屬加入適量的不同血清，一般可加入胎牛血清，若小牛血清增殖效果差，應(yīng)加胎牛血清(FBS)，通常濃度為10%～20%。
2. 培養(yǎng)基的選擇：常用的有DMEM，M199培養(yǎng)基。培養(yǎng)兔的平滑肌細(xì)胞用DMEM效果較好。
3. 種植組織塊的數(shù)目，如75cm2的長頸瓶組織塊不得少于30。
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