T4 DNA連接酶 | 9015-85-4

英文名稱 ： T4 DNA Ligase

C A S ： 9015-85-4

保 存 ： -20°C

分子量 ： 55.3kDa，單體

級(jí) 別 ： BR

分子量 ： 55.3kDa，單體

來(lái) 源 ： 含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌

濃 度 ： 1u/ul(200CEU/ul）

濃 度 ： 5Weiss u/ul(1000CEU/ul）

濃 度 ： 30Weiss u/ul(6000CEU/ul）

活性定義 ： 是指在ATP-PPi交換反應(yīng)中，37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量（weiss單位，1個(gè)weiss單位相當(dāng)于約200個(gè)粘性末端連接單位。1個(gè)粘性末端連接單位：20ul反應(yīng)體系（50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端）中，在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量）

酶活性分析混合物 ： 66mM Tris-HCL(PH7.6), 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]

保存液組分 ： 20mM Tris-HCL(PH7.5), 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA和50%(v/v)甘油

10×T4 DNA Ligase緩沖液（#B69） ： 400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP(PH7.5,25℃)

抑制劑 ： 當(dāng)反應(yīng)體系中NaC1或KC1的濃度超過(guò)200 mM時(shí)，可強(qiáng)烈抑制T4 DNA Ligase活性

失 活 ： 65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘

注 意 ： T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會(huì)改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率，為避免此現(xiàn)象，電泳前需處理樣本或分子量標(biāo)準(zhǔn)。樣本處理如下：樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存；轉(zhuǎn)化時(shí)，連接產(chǎn)物的體積不得超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積中的10%；電轉(zhuǎn)化之前，先用氯仿抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase，然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物

質(zhì)量控制 ： 測(cè)試表明無(wú)內(nèi)切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測(cè)：粘性末端或平末端DNA的連接能力

性 狀 ： 液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團(tuán)和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復(fù)合體中的單鏈切口，連接DNA的粘性和平末端，但該酶對(duì)單鏈核酸無(wú)酶活性。該酶需要輔因子ATP

用 途 ： 生化研究。粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接；雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接；雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復(fù)合體中缺口的修復(fù)；連接酶介導(dǎo)的RNA檢測(cè)；位點(diǎn)特異性突變；擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性